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你想了解的鼠抗微囊藻毒素LR單克隆抗體上線了

　更新時間：2020-05-21    點(diǎn)擊量：834
 　　微囊藻毒素(MC)是一種環(huán)狀七肽物質(zhì)，由古老的原核生物藍(lán)藻代謝釋放產(chǎn)生，有80種異構(gòu)體，對動物和人有強(qiáng)烈的肝毒性，其中常見的MC有MC-LR、MC-RR和MC-YR。目前研究顯示水體含量高，毒性大的是MC-LR，能誘發(fā)肝癌，近期研究還發(fā)現(xiàn)低劑量的MC-LR即能損傷神經(jīng)細(xì)胞、生殖細(xì)胞。在淡水水體富營養(yǎng)化的今天，藍(lán)藻爆發(fā)事件時有發(fā)生，MC污染對人類的健康造成了嚴(yán)重威脅。
　　檢測MC-LR的方法主要有物理和化學(xué)方法，物理方法主要用于定性和定量測定毒素，依靠的精密儀器，一般價格昂貴、操作繁瑣，尚不能國產(chǎn)化；化學(xué)方法主要用于監(jiān)測水體和食物鏈中MC-LR的水平，可操作性強(qiáng)。本研究著眼于MC-LR的快速、靈敏、定量檢測，從反應(yīng)條件、方法性能等方面評估添加酶聯(lián)免疫(ELISA)、時間分辨熒光免疫分析(TRFIA)和納米均相時間分辨熒光免疫分析法(NH-TRFIA)這三種免疫分析的特點(diǎn)。
　　鼠抗微囊藻毒素LR單克隆抗體利用克隆抗體技術(shù)制備抗*型抗體方法相對單抗生產(chǎn)技術(shù)簡單，容易操作，但如果需要量大，需要多次制備，同時需要除去抗同種型抗體。主要方法是將已生產(chǎn)出的單抗(Ab])直接免疫試驗動物，然后提取血清，純化血清即可。本實(shí)驗首先利用飽和硫酸銨二步沉淀法初步純化鼠抗微囊藻毒素LR單克隆抗體，再用G蛋白親和純化柱進(jìn)一步純化抗體，通過SDS-PAGE電泳實(shí)驗鑒定純化*，回收率87.57%。
　　在溫和條件下采用木瓜蛋白酶酶切純化后的鼠抗微囊藻毒素LR單克隆抗體，利用DEAE-52離子交換樹脂柱分離抗體酶切片段，獲得其抗體的決定簇F(ab")2片段，并對該片段的免疫活性及產(chǎn)率進(jìn)行測定。結(jié)果顯示該片段免疫活性降低50%為1:12000但仍然可以作為抗原制備抗*型抗體。然后利用該抗體片段作為新的免疫原，按照常規(guī)免疫方法免疫異源受體BalB/C小鼠，獲得微囊藻毒素抗*型抗體。
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